在达到那种硅胶旋转柱之前，停止考虑某些方法可以在没有套件的情况下纯化DNA。DNA净化试剂盒具有优势：它们方便，提供均匀，一致的结果。但由于他们的费用和对实验室设备的要求，它们也不太可访问。加上他们创造塑料废物。当您需要它们并累积一堆未使用的缓冲区时，套件也可能具有令人讨厌的趋势，因为您已耗尽列。
诱导套件的DNA净化方法避免了套件的许多缺点，通常遵循相同的原理：细胞裂解，除去RNA和蛋白质以使您与DNA保持脱节。然后洗涤该DNA，并从固定表面洗脱或沉淀，干燥，然后再水化。取决于您纯化的DNA的类型（质粒，基因组或来自琼脂糖的DNA片段的DNA的类型存在微小的修饰。
在这篇文章中，我们将介绍四种基本的DNA纯化方法，以及一种从DNA纯化试剂盒中重复使用硅柱的方法。
试剂盒碱性裂解质粒细胞
起始材料：2 mL细菌培养
产品：质粒
这Addgene的无试剂盒质粒微型制备方案采用与柱状质粒提取试剂盒类似的工作流程。首先，你溶解细菌，使DNA和蛋白质在溶液中变性。然后用一种再生溶液降低pH值，使蛋白质和基因组DNA沉淀。质粒DNA在溶液中是自由的。通过离心去除蛋白质和基因组DNA。在这一点上，质粒DNA样本可以用RNase处理以去除RNA污染，你可以使用苯酚氯仿提取来去除剩余的蛋白质和RNase。最后，DNA用酒精沉淀，在TE缓冲液中重悬。在这之后，DNA就可以使用了!
玻璃注射器过滤器质粒纯化和DNA凝胶萃取
起始材料：细菌培养或琼脂糖凝胶切片
产品：质粒或DNA片段
中描述的质粒纯化和DNA凝胶提取方法金姆和莫里森几乎与市售套件的套件相同，而不是将DNA与硅柱结合，而是束缚玻璃注射器过滤器。通常DNA不结合二氧化硅或玻璃，而是添加高浓度的络脱盐（盐酸胍，用于质粒净化方案，胍异硫氰酸酯凝胶提取方案）用水分子破坏DNA的氢键，并将其驻扎在粘附到疏水玻璃过滤器中。每个玻璃过滤器可捕获高达150μg的DNA，并且滤光器可以串联堆叠，以增加绑定容量。
 |
| 图1：使用玻璃过滤器纯化DNA。图像：金和莫里森，2009年。 |
该方法提供类似于商业套件获得的DNA产量和质量，但在较少的时间内。作者估计了基于重力的柱质粒maxiprep套件需要1-1.5小时完成，而这种基于注射器的方法可以在20至30分钟内完成。此外，虽然商业质粒预备套件以谨慎的尺寸（迷你，MIDI，MAXI，GIGA），但需要您以不同目的购买不同的试剂盒，并使用Kim和Morrison方法来调整您使用的玻璃滤镜的数量on the size of bacterial culture you’re working with. Overall, the glass syringe filter method is not only cheaper, but also faster and more flexible than commercial kits.
用玻璃牛奶萃取DNA凝胶萃取
起始材料：琼脂糖凝胶切片
产品：DNA片段
你可能想知道，“牛奶如何帮助我从琼脂糖凝胶中提取DNA？！”
用玻璃乳法提取DNA凝胶萃取方法来自芝加哥大学的Bishop实验室不使用实际的牛奶纯化DNA，而是一种玻璃粉末浆料，具有乳状外观。为了使DNA粘附到玻璃牛奶中的玻璃颗粒中，首先将凝胶切片置于切色盐钠碘（NAI）溶液中。Nai在该方案中有两个目的：1）它溶解了DNA和琼脂糖，2）它有助于DNA粘附到玻璃上。结合DNA后，通过离心沉积玻璃颗粒并在用水或TE洗脱DNA之前洗涤。
主教实验室的玻璃乳议定书于1979年改编帕特森协议。出版时，PATTERSON方案显示纯化大小的DNA大小，高产率，萃取过程中的降解，净化为48kb。另外，纯化的DNA不含琼脂糖，可以用限制酶消化。
纤维素核酸纯化
起始材料：植物，微生物，血液或哺乳动物细胞或组织
产品：总核酸
虽然玻璃或二氧化硅通常用于结合和纯化DNA，但纤维素也有效地结合或至少捕获核酸。Botella Lab利用了这个财产和开发了一个协议使用Whatman No.1纸或甚至纸巾以在30秒或更短时间内从植物，微生物，血液或哺乳动物细胞中纯化DNA和RNA，而不使用移液管。
以下是这种方法的作用：核酸用盐，洗涤剂和滚珠轴承的溶液脱离细胞。然后将纤维素二滴浸入该混合物中以吸收核酸。容纳剂与核酸紧密结合纤维素，因此将量焦油放入洗涤溶液中除去污染物，而核酸粘在一点。最后，通过将纤维素直接浸入PCR缓冲液中，释放纯化的总核酸，其中可以扩增DNA或RNA。与商业磁珠基试剂盒相比，这种基于纤维素的方法更快，更便宜，并且具有相似的敏感性水平。
 |
| 图2：使用纤维素Dipstick纯化DNA的步骤。图像：Zou等人，2018。 |
用于DNA纯化的二氧化硅柱再生
起始材料：PCR产物或琼脂糖凝胶切片
产品：纯化的PCR产物或DNA片段
也许你还没准备好放弃DNA净化套件，但你想减少实验室的废物足迹。赵和邓实验室发展了一个简单再生二氧化硅柱的方法具有PCR产物纯化或DNA凝胶提取试剂盒。该方法需要不到30分钟，只需要用1M磷酸孵育3分钟，然后在用DDH 2 O洗涤之前，总共4次，然后在用DDH 2 O然后乙醇洗涤3分钟。再生后，通过QPCR检测，仍然可以从柱中洗脱痕量的DNA（3次毛细图/ UL），但这并没有减少克隆效率。
与新鲜柱相比，再生柱具有类似的DNA产率。另外，高达5次再生的柱具有类似的DNA产量作为新鲜柱，表明列可以至少重复使用五次。DNA净化试剂盒不带足够的缓冲区用于该列的许多用途，但赵和登革实验室发现他们只需在套件缓冲区耗尽时制作自己的缓冲区。自制缓冲器与随着套件提供的自制缓冲器相同。虽然没有作者测试，但是，也可以用1M磷酸和重复使用使用的质粒净化柱，但痕量污染可能会干扰解释转染检测结果。
出发并没有套件表演你的DNA提取物！
无论您想要净化的DNA的类型或您想要去套件的动机，还有一种方法！即使您还没有准备好与您的DNA净化套件分发，您仍然可以减少完成研究所需的旋转列数。您是否知道当今帖子中未提及的其他核酸纯化方法？让我们在评论中知道！
addgene博客上的其他资源vwin.com mobile
addgene.org的资源
- 找到分子生物学和克隆的协议
- 阅读我们的分子生物学参考
- 访问我们协议视频库
参考文献
Kim，Y.，＆Morrison，S.L.（2009）。使用玻璃注射器过滤器的快速和经济的内部DNA净化方法。普罗斯一体。https://doi.org/10.1371/journal.pone.0007750
Vogelstein，B.，＆Gillespie，D.A.（1979）。琼脂糖中DNA的制备和分析纯化。美国国家科学院的诉讼程序，76 2，615-9。https://doi.org/10.1073/pnas.76.2.615
周，Y.，张，Y.，He，W.，Wang，J.，Peng，F.，Huang，L.，Zhao，S.，＆Deng，W。（2018）。从PCR纯化和凝胶萃取试剂盒中快速再生和再利用二氧化硅柱。科学报告。https://doi.org/10.1038/s41598-018-30316 -6.
邹，Y.，Mason，M.G.，Wang，Y.，Wee，E.J.，Turni，C.，Blackall，P.J.，Trau，M.，＆Botella，J.R.（2017）。（2017）。在30秒内从植物，动物和微生物纯化核酸。PLOS生物学。https://doi.org/10.1371/journal.pbio.2003916
话题：分子生物学协议和提示那质粒
发表评论