你已经准备好了你的DNA，你准备好在你的实验下的下一步开始。但在许多情况下，在净化后，您不会在最终管中看到任何DNA的迹象。你怎么知道你是否真的在你的管子里有DNA而不看到它吗？
有很多方法可以做到这一点，您所选择的方法可以基于您的下游应用程序、时间和工具可用性。
紫外吸光度
利用紫外吸收是量化DNA最常用的方法之一。这种方法包括测量光通过液体的吸光度/透射率，以确定液体中物质的浓度。分子不同程度地吸收不同波长的光，许多分子都有其最大吸收的特定波长。分光光度计用紫外透明比色管测量这些吸光度。首先你测量DNA缓冲液的吸光度。这是一个“空白”和测量背景的吸光度。然后测量DNA样本的吸光度。
这些吸光度措施让您了解您的DNA准备浓度以及是否有其他污染物。核酸（DNA和RNA）在260nm处最大地吸收。另一方面，蛋白质在280nm和有机化合物中吸收最佳，并且在230nm时最大地吸收的椎间相盐。A260 / A280比例用作DNA纯度的指示。理想情况下，此数字应在1.8和2.0之间。如果大于1.5，A260 / A230比率最佳。
然后，使用A260读数，你可以计算出DNA浓度。一般来说，1.0的A260相当于50 ug/ml的纯dsDNA。使用下面的公式来估算你的DNA:
浓度(ug/ml) = A260读数×稀释倍数× 50 ug/ml
该方法简便快捷，不需要任何特殊试剂。然而，它在低浓度的DNA中灵敏度有限，而且不能区分DNA和RNA。
荧光染料
量化DNA的另一种方法是使用荧光染料，当与DNA结合时荧光染料。这里的主要区别是这些染料，例如微微绿色或Sybrenteen，是双链DNA的特异性（与测量所有核酸的分光光度法相比）。这些方法比UV吸光度更敏感，特别是当您期望样品中的低浓度并且通常用于量化DNA进行下一代测序时。
与基于吸光度的方法不同，基于荧光的方法需要一个标准曲线，一组已知DNA数量的样本及其相应的荧光。这样，你就可以将你的样本的荧光与这条曲线进行比较，从而量化你的DNA准备。虽然这种方法需要更多的时间在实验室设置，你可能不需要自己计算，因为许多荧光计会为你计算你的样本浓度。
琼脂糖凝胶电泳
虽然这不是最快的量化DNA的方法，但你可以使用琼脂糖凝胶法，不仅可以发现你有多少DNA，还可以查看你的DNA是否完整或大小是否正确。这是基于吸光度的方法无法告诉你的你不需要分光光度计或荧光计来量化DNA。
首先，开始把你的凝胶含有DNA嵌入染料（例如溴化乙锭）并选择具有已知浓度的DNA梯。许多商业DNA梯子将告诉您梯子中每个频段的浓度。然后，您将DNA的样品以不同的稀释液运行，并根据DNA的带强度相对于梯子的强度进行量化。最好比较梯子中的片段的频带强度，其尺寸最近的尺寸为DNA。该方法最适用于DNA片段（如PCR产物）。该方法还基于其他带或条纹的存在，给出DNA或RNA污染的指示。与基于吸光度的方法不同，这种方法不会告诉您关于污染蛋白质或椎间晶盐。
毛细管电泳
使用毛细管电泳定量DNA类似于使用凝胶电泳定量DNA。除了，它较小。和自动化。
与凝胶电泳不同，您只需要1-2UL样品，并且运行时间仅为每种样本几分钟。在运行期间，DNA片段通过微型或纳米流体通道移动，并通过电泳分离样品。较小的片段比较大的碎片更快地迁移。使用荧光染料随着时间的推移量化这些片段，该荧光染料在DNA中嵌入，使得在较大的碎片之前首先定量较小的片段。
 |
| 图1:使用毛细管电泳对RNA阶梯的定量，显示随时间变化的荧光单位。较小的片段比较大的片段迁移得更快。从图片OpenWetware.。 |
这种方法常用于下一代测序或微阵列研究，不常用于标准质粒制备。
二苯胺法
另一种基于吸光度的DNA定量方法是使用二苯胺。二苯胺在酸性条件下与脱氧核糖糖反应，形成一种可在595 nm处定量的蓝色络合物。
该方法耗时长，灵敏度低，不常用。但是，测量是在可见范围内进行的，如果没有其他仪器，可以用标准ELISA阅读器读取。
最后一些关于DNA定量的提示
在选择DNA定量方法时，需要考虑很多因素:成本、时间、设备和预期DNA浓度。重要的是要考虑每种方法的优点和缺点，以及什么时候一种方法可能比另一种更适合。
Addgene博客上的其他资源vwin.com mobile
- 阅读更多关于分子生物学协议和提示
- 找出洗脱和储存质粒DNA的最佳方式
- 了解不同等级的质粒DNA制备
在Addgene.org上的资源
- 参观分子生物学参考
- 找质粒为您的研究
- 浏览分子生物学，克隆等方案的协议
主题:分子生物学协议和提示,质粒
发表评论