热质粒和病毒制剂 - 1月2021年1月

每隔几个月，我们通过我们突出了存储库中的新质粒和病毒准备的子集热质粒的文章。这些文章提供了最近质粒沉积的简要总结，我们希望它们能让你更容易地找到和使用你需要的质粒。如果你想写关于最近的质粒存款请签名这里。

这是你在这篇文章中找到的内容：

• 用于细菌的蓝光诱导克雷
• CRISPR-CASON.
• mGold，一种新的黄色荧光蛋白
• 新的CRISPR质粒
• 来自病毒服务的新项目

快速蓝光诱导Cre精确控制细菌基因表达

通过梅根·“政府改造”

可是识别，切割和改变DNA中的特异性靶序列的酶导致各种结果，包括切除或插入，反转，易位或盒式交换。通过利用重组酶来操纵基因组，科学家可以控制其感兴趣的基因的表达。虽然重组酶是其自己的强大基因表达工具，但它们的活动可以通过使用微调并精确控制光遗传学。光遗传学工具利用光诱导蛋白质的构象变化。

将用于重组酶活性的RFP报告酶活性的细胞暴露于蓝光。与其他重组酶/光电聚体对相比，CRE-VVD显示出显着提高的活性。使用biorender.com创建

在最近的ACS合成生物学杂志上，Mary Dunlop的实验室通过使用Vivid (Vvd)光二聚体分裂并连接蛋白质区域，产生了一个光敏的Cre, opto - crea -Vvd。在蓝光的应用下，Vvd使c端和n端Cre片段聚在一起并允许重组酶活性。opto - cres - vvd是精确的，显示低灵敏度的环境光，并多才多艺，因为它可以被低强度和高强度蓝光激活。不像其他的分裂cre系统，它可以占用24小时削减， opto - crea - vvd是快速的，可以切入在短短2小时。

床单，MB等，ACS合成BIOL。2020。https://pubs.acs.org/doi/10.1021/ acssynbio.9b00395

o'brian，sp，等，Biotechnol J. 2014。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24390935/

超紧凑基因组编辑器CRISPR-Casɸ

通过梅琳娜粉丝

杜德纳实验室发现了CRISPR-Casɸ，这是一个来自大型噬菌体Biggiephage分支的超致密基因组编辑器，这为CRISPR-Cas工具箱增添了新的内容。本文研究了Casɸ的三个同源物Casɸ-1、Casɸ-2和Casɸ-3。

这个系统值得注意的原因有几个。casɸ仅为~70kDa，分子量约为Cas9或Cas12a的一半。部分原因是它只有一个活动站点。Casɸ中的RuvC活性位点既可以处理crRNA，也可以进行crRNA引导的DNA切割，这与其他特征良好的Cas酶依赖于多个活性位点不同。此外，Casɸ有最小的PAM需求。例如，casɸ-2的PAM序列是5 ' -TBN-3 '(其中B是G, T，或C)。作者证明了crispr - casɸ是活性的体外以及人类和植物细胞。

来自Biggiephage的Casɸ可以消除竞争的流动遗传元素。由Basem Al-Shayeb在Doudna Lab的图像。

由于交付的限制，寻找更紧凑的基因组编辑器的科学家和寻找更广泛的目标基因组序列的科学家可以受益于CRISPR-Casɸ。

Pausch等人，科学2020，https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32675376/

MGOLD，最具光稳定的黄色荧光蛋白到目前为止

通过贾斯汀Ng

高通量筛选方法，例如荧光激活的细胞分选（FACS）有助于研究人员筛选成千上万细胞以识别表现出感兴趣的特性的细胞。然而，FACS不能在空间和时间上靶向单个细胞。现在，Francois St-Pierre的实验室开发了一种基于流式细胞仪(facs)的细胞筛选、单细胞表型观察和光标记(SPOTlight)的新形式，作为一种从大规模异质培养中分离出具有独特时空表型的单个细胞的方法。

HeLa细胞表达角蛋白与mGold(上)和mVenus(下)融合。每30秒成像一次，持续3小时。从图片Lee等，2020年。

利用SPOTlight对300多万种表达黄色荧光蛋白(YFP)变异的细胞类型进行了成像。该团队发现了一种新的YFP变种mGold。mGold被发现比母YFP mVenus的光稳定性高5倍，亮度也更高，是迄今为止最稳定的YFP。因此，mGold有望用于需要高光稳定性的实验，如延时成像或分子的高光功率检测。

Lee，J.等，科学推进2020。https://doi.org/10.1126/sciadv.abb7438

Crisprcler

通过德赢在线

以下是近期Crispr质粒的一些亮点。找到从加法中获得的所有CRISPR质粒，前往我们的CRISPR质粒和资源页面。

• CDDR（基于CRISPR-CAS9的双荧光DSB修复）是哺乳动物细胞的双链断裂修复测定。这是基于荧光报告者中两种DSB的引入和分辨率。
• 在这里找到质粒
• Yongsub Kim的实验室工程师编辑拓展了他们的PAM灵活性。
• 在这里查找工程化的主要编辑器
• Kivanc Birsoy建立了一个针对人类表观遗传基因的慢病毒CRISPR敲除文库。
• 在这里找到图书馆
• 与目前的n端连接的SaCas9 ABE变体相比，一种新的SaCas9 ABE变体(microABEI744)提高了靶点编辑效率，减少了rna离靶点足迹。它也是最小的aav可交付ABE之一。
• 在这里找到质粒
• Jesse Zalatan的实验室沉积在酵母中的化学诱导型Crispra系统的质粒是通过募集MS2官能化GRNA的介导的。
• 在这里找到酵母CRISPRa质粒
• 使用这种慢病毒CRISPR人类基因组宽的图书馆减少了CRISPR屏幕的规模，由Leopold部件沉积。该库可提供2个随机配对的每个构造，并且与较大的基因组图书馆相比，屏幕中的缩小缩小而不会降低。
• 在这里找到图书馆

新病毒服务

通过杰森Nasse

我们经常从我们的质粒收集中添加新的病毒等分试样提供即用型病毒准备。以下是最近几个月的一些新病毒准备方法：

• Gordon Fishell实验室针对GABA神经元构建的扩展血清型现已可用。血清型包括AAV1和AAV9。
  • 在这里找到病毒制剂
• paav - hsyn - crea - p2a - dtomato现在在AAV1和AAV8，以及AAV5和AAVrg中都有。
  • 在这里找到CRE表达的病毒准备
• 来自Lin Tian Lab的Aav-CAG-Dlight1.3b现在可以在Serotype Aav5中使用viral prepys，以便使用Viral Prep！
  • 在这里获取狄t1.3b.
• 想在你的实验中找到一个好方法吗?Nirao Shah和Jim Well实验室的AAV-flex-taCasp3-TEVp可诱导cres依赖的细胞凋亡。现在可以在AAV5血清型中随时使用病毒制备。
  • 在这里找到AAV-Flex-TACASP3-Tevp
• 靶向Parvalbumin皮质型中间核（C1v1）的红移频道曲泛黄（C1v1）现在可用作准备在血清型AAV5中使用病毒制备。
  • 这里是通道视紫红质
• 星形胶质细胞特异性紧密性谷氨酸谷氨酸传感器，来自AAV1的Loren Looger实验室。
  • 获取gfap.sf-iglusnfr.a184s-aav1
• 新的双重和三重特征来自Deisseroth实验室的Intrsival Preps现在可用。
  • 在这里找到所有Deisseroth病毒准备
• 快到了!来自Sanford Boye实验室的新型AAV血清型具有增强的视网膜趋向性。
  • 在这里找到即将出现的血清型