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CASANOVA对CRISPR-Cas9的光遗传控制
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听听反crispr的播客部分
抗CRISPR (Acr)蛋白能有效抑制II型CRISPR系统，包括流行的链球菌Cas9（Rauch等人，2017年,Hynes等，2017年)。然而，ACR抑制在空间上和暂时普遍存在，使它们成为控制CRISPR的相当钝的仪器。将更好的控制转到ACR活动作为生物工具，niopek.同事们转向光遗传学。通过使用光敏蛋白质结构域，它们已经开发了一个系统使用蓝光控制CRISPR-Cas9的活性(Bubeck等人，2018年)。
通过插入照片敏感的Lov2域来完成此目的答:漂白亚麻纤维卷进入ACR蛋白Acriia4的环形区域。在黑暗中，Acria4抑制了Crisprpress活动。随着蓝光的添加，LOV2结构域的终端螺旋展开，破坏蛋白质构象，从而抑制ACR的功能。这允许CRISPR-CAS9在其目标上运行。他们称他们最有效的ACR-LOV融合蛋白抑制剂Casanova用于“CRISPR-CAS9活性切换的Acria4的Crisp-Cas9活性切换”。Casanova快速回应蓝光。在灭活Casanova复合物的几分钟内，观察到结合端粒体DNA的荧光卷曲复合物。Casanova有什么伟大的？它适用于链球菌CAS9，DCAS9效应器融合器和XCAS9，不需要额外的化学品或修改。这种多功能性在许多遗传靶向和编辑实验中打开了空间和时间控制的可能性。
Bubeck F等人，《自然方法》2018。PubMedPMID：30377362。
使用荧光电压指示器研究神经元活动
聆听电压指示器播客段大脑中的神经元使用电气冲动来协调情绪，思想和行为。从历史上看，科学家通过将电极插入大脑来研究大脑中的电活动。但这个过程是耗时和昂贵的。因此，科学家们已经转向基因编码的电压指示灯。
为了扩展电压指示器工具箱，Ed Boyden的实验室开发了一种快速筛选成千上万的蛋白质可以通过成像报告电活动的方法。他们采用光敏蛋白质Quasar2并系统地突变。使用机器人采摘方法选择具有所需变体特性的单元格，团队识别了archon1，这是一种基于新型Opsin的荧光电压指示器。archon1可以自身嵌入到电池膜中，然后可以测量电池电压。Archon1明亮，呈现良好的本地化，具有高信号：噪声比，高灵敏度，快速响应，是光稳定的，并且与光学控制兼容。研究人员还表明，archon1在各种动物模型中是小鼠的功能，C。elegans.,斑马鱼。
Piatkevich KD等人，Nat Chem Biol 2018. PubMedPMID：29483642。
利用2in1载体克隆系统使蛋白质-蛋白质相互作用研究更容易
聆听2IN1克隆播客段最近,Grefen Lab.引入“2in1”载体克隆系统-一种Gateway兼容的方法，可以同时将两个感兴趣基因(GOI)克隆到一个质粒上的两个独立表达盒(Grefen和Blatt, 2012)。类似的传统Gateway™克隆，印度政府首先需要克隆到一个入口向量。2in1克隆系统包含两个输入向量(PUC57-L1L4和pUC57-L3L2提供使用的好处限制摘要克隆在2in1向量中引入GOIs而不是GatewayTM克隆BP反应，即通过重组插入GOI。
2in1克隆系统非常适合于依赖农杆菌瞬时转染系统的植物中的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)研究尼古利亚娜·宾夕法尼亚州或者拟南芥意大利（邢等人，2016))。在农杆菌介导的DNA转移过程中，每个GOI通常从不同的质粒中表达，这可能导致不同的基因剂量和蛋白质共表达的高变异性。通过引入含有两种GOIs的质粒，可以更均匀地控制表达水平。Grefen实验室利用2in1克隆系统生成了一系列质粒用于PPI的研究Förster共振能量转移（烦恼，Heckler等人，2015年）或比例的双分子荧光互补（RBIFC，Grefen和Blatt，2012）。这2 in1质粒工具包由4种不同的二元2In1载体产生的4个质粒工具组成，具有所有可能的标签取向组合（NN，NC，CN和CC）。4个套件还包含两个进入矢量PUC-L1L4和PUC-L3L2。
Mehlhorn DG等，方法，Mol Biol, 2018。PubMedPMID: 29043675。
格雷芬C和布拉特先生。2012年生物学技术。PubMedPMID: 23066669。
Hecker A等人，植物Physiol 2015. PubmedPMID: 25971551。
发现用于光可切换蛋白cPYP和AsLOV2的新的蛋白结合工具
聆听照片开关的蛋白播客段光度可逆控制光学蛋白质，其响应光的蛋白质构象变化，提供了在空间和时间控制细胞过程的方法在活的有机体内。许多光活性蛋白质存在于自然界中，但是将它们发展成致光学工具可能是困难的，因为这需要对蛋白质的详细结构知识。克服这一挑战，uppalapati和伍尔利实验室开发了一种噬菌体展示技术，使用小支架蛋白识别新的结合蛋白，结合光可切换cPYP的光态和暗态，响应蓝光(445nm)，构象改变。发现和应用只与光或暗状态的可光切换蛋白质结合的蛋白质伙伴提供了一个强大的方法来控制细胞中的蛋白质相互作用，因为蛋白质结合物可以定制为蛋白质可视化、迁移、降解、修饰和支架。
在他们的学习Woolley实验室的研究表明，这些光可逆的蛋白质-蛋白质相互作用可以控制亚细胞定位过程在活的有机体内。他们把产生的致硫型质粒工具其中包括编码cPYP和tgRFP融合的质粒(PLL7.0 TGRFP CPYP.）和对蛋白质结合物（其与光学性蛋白质的光或暗状态结合的质粒融合到与线粒体定位序列汤姆20（Ptriex Tom20 Mvenus Bopd)。在表达这些质粒的暗适应细胞中，tgRFP荧光定位于线粒体，因为cPYP与BoPD结合。一组类似的新鉴定的光和暗结合质粒工具也被用于可切换AsLOV2。
Reis Jm，等。ACS合成生物学。2018 PUBMED.PMID：30203962。
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