热质粒 - 10月2020年

由各种addgenies.

各种addgenies10月13日，2020年

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用弓式标记兴奋性和抑制突触蛋白

自上锋之日起加尔吉和Cajal.，神经科学家已经开发并改进了许多工具来挑剔脑部结构和功能的细节，并在每个工具的出现扩展我们的学习能力和理解人类大脑中860亿神经元的复杂互通。但研究突触联系和生理学尤其具有挑战性，因为它们的数量很大，通常很小，并且可以含有不同的神经递质。使用遗传编码的荧光蛋白与用mRNA显示器（Fingrvwin德赢娱乐平台s）产生的纤连蛋白内部，薛汉的实验室开发了AAV载体，以选择性地在大脑中可视化兴奋性和抑制突触。

绿色，红色，Cre-诱导和逆转录病毒指控变体使用AAV递送到小鼠中。它们可用于定义神经群体中的双色突触标记或突触标记。

图1：不同束缚构建体的示意图和实验结果。来自Bensussen等人的图像。，2020。

手臂构建体靶向突触脚手架蛋白PSD95和Gephyrin分别标记兴奋性和抑制突触。曾经在神经元中表达，牵引效果与内源突触蛋白结合，允许它们定位于突触并使来自细胞的其他区域最小化无关荧光。通过组合表达不同荧光蛋白的载体靶向抑制或兴奋性突触或克雷诱导，研究人员可以在没有抗体vwin德赢娱乐平台标记的限制的情况下探索突触积分和连接。这打开了门体内试验，例如跟踪海马成人出生的颗粒细胞的突触成熟模式随时间未以前不能进行的。

Bensssen S等人，Iscience 2020。https://doi.org/10.1016/j.isci.2020.101330

Split-Wrmscarlet，荧光蛋vwin德赢娱乐平台白系统Caenorhabditis elegans.

经过德赢在线

vwin德赢娱乐平台传统上引入的荧光蛋白（FPS）Caenorhabditis elegans.在面料瘤中，阵列可以导致由于过表达引起的伪影。CRISPR可以将FP基因插入目标基因的本地基因座，但引入了大的遗传变化C。elegans.由于它需要较低的双链模板，而不是更有效的难度单链寡脱氧核苷酸供体（SSODN）。那么如何使用CRISPR来引入大型FP基因C。elegans.？通过使用分割FP方法。

Split-wrmscarlet是一个新的分体式红色FP，蠕虫在蠕虫中比分裂 - sfcherry3更亮。它是由Maria Ingaramo，Jerome Goudeau，Cynthia Kenyon.卡利科生命科学的同事。与许多拆分fps一样，split-wrmscarlet由两个不荧光的两个fp片段组成。当两件碎片聚集在一起时，他们保险丝和荧光。团队工程师C。elegans.用于表达WRMSCARLET的细胞系_1-10没有与任何其他细胞蛋白质无关。他们用SSODN模板使用CRISPR来介绍小WRMSCARLET_11.其长度小于60nt以标记靶蛋白。该团队通过针对六种不同的基因验证了该工具，其蛋白质产品具有明显的本地化。

图2：具有不同亚细胞位置的分裂wrmscarlet标记蛋白。来自Goudeau等人的图像。，2020。

Goudeau，J.Biorxiv 2020。https://doi.org/10.1101/2020.07.02.185249.

预测细胞周期长度与组蛋白融合荧光定时器

经过凯特哈顿德马奥

对细胞周期试图了解发展，再生和某些疾病状态的研究。但是，很难观察细胞周期体内，特别是如果细胞是迁移或深层组织。要解决这个问题，上秦郭和耶鲁大学的同事融合了一种变色的荧光定时器（FT）蛋白，允许在活细胞中观察的组蛋白H2B。荧光定时器在合成时发出蓝光，并且在几个小时后，构象变化会导致蛋白质发光红色。H2B-FT-red持久是持久的，并且在原发性小鼠胚胎成纤维细胞中显示出84小时的半衰期。该融合蛋白可用于通过检查蓝色至红细胞的比例来确定细胞周期长度。正在进行快速细胞循环的细胞具有高蓝色的红色比，而具有长或缓慢循环的细胞比蓝色更红色（伊斯曼等人。，2020年）。

图3：用H2B-FT病毒转导BAF3细胞，并以不同浓度的IL-3生长。高浓度IL-3生长的细胞显示出高比例的蓝色荧光，表明细胞增殖。在没有IL-3的培养基中维持的BAF3细胞仅显示红色荧光。来自Eastman等人的图像。，2020年。

研究人员在急性髓性白血病中对胚胎发育的几种情景从胚胎发育中进行了几种情况，并展现了H2B-FT的表达一致地预测这些不同细胞类型的细胞周期速度。在一个实例中，H2B-FT在鼠B细胞（BAF3）中表示，这取决于IL-3以增殖。用低剂量IL-3培养的细胞显示出扩增减少，并且通过流式细胞术测量的红细胞具有更多的红细胞。在高IL-3中生长的细胞显示出大多是蓝色荧光，表明快速细胞周期。含有IL-3退出的细胞完全是红色，因为它们不能增殖。