Inntags:创新蛋白表位标记

由玛丽传动装置

玛丽传动

不同的蛋白质标签:Myc,ha和Inntag。首先在20世纪80年代描述,蛋白质标签现在是科学家工具箱中最有用的项目之一。我们覆盖了质粒101.,标签可以帮助您确定感兴趣的蛋白质的定位,纯化它,或确定其表达水平而不需要定制抗体。有一个主要的警告 - 标签可能干扰蛋白质定位和/或功能,因此必须小心地测试每个标记的蛋白,以确保其保留天然蛋白质的属性。由于这个过程需要很多时间和能量,MartíAldea和合作者创建了一组“无害的标签”(Inntags.)不太可能改变蛋白质的性质。

为什么我们需要新的表位标签?

像标志,HA和MYC这样的短表位标签可以采用许多不同的构象,因此可能与它们标记的蛋白质相互作用。实际上,最近的一项研究400例蛋白发现,20%的标记蛋白质没有与其未标记的对应物体类似地定位。这些发现有动力Georgieva等人。开发具有定义3D结构的新标签,不太可能损害蛋白质折叠和功能。使用生物信息分析,它们还选择了其他关键特性,特别是对其他蛋白质的高溶解性,有限的亲和力,以及抗体的可用性。从他们的初始候选者池中,他们选择了来自非脊椎动物系统的12个候选蛋白质结构域。初步测试表明InntagsIT5.IT6., 和IT10在细胞中表达良好,没有形成不希望的聚集体。

使用萌芽酵母作为模型系统,Georgieva等。检查了效果GFP融合到Inntags或传统标志,HA和MYC标签。与未标记的GFP过表达相比,IT6-GFP没有减少酵母细胞大小或活力,而其余的融合对这些参数对这些参数产生了一些负面影响。IT5和IT6在免疫荧光和免疫沉淀应用中显示出具有良好的结合效率,但传统标签都没有适用于这两个应用。

证明Inntags确实是无害的,Georgieva等。创建标记的cyclin版本CDC28和伴侣ydj1.,两者都显示与多个其他蛋白质的复杂相互作用。同样,用IT5和IT6融合观察到细胞形态的几乎没有变化。相比之下,国旗和HA标签对细胞尺寸和生长速率特别有害影响,表明它们受到蛋白质 - 蛋白质相互作用。

如果您正在寻找蛋白质,IT5和IT6是一个很好的开始。这些标签易于在多个公共应用中使用。由于它们对天然蛋白质结构的影响有限,Inntags可能成为检查蛋白质 - 蛋白质相互作用的选择的标签,特别是在单分子或高通量应用中。也许IT5和IT6甚至会替代我们旧的表位标签 - 只有时间会告诉!


参考

1。Georgieva,Maya V.等人。“Inntags:针对无害的蛋白质标记的小型自身结构展示表。”自然方法(2015)。PubMed.PMID:26322837

2。Stadler,Charlotte等。“免疫荧光和荧光蛋白标记显示哺乳动物细胞中蛋白质定位的高相关性。”自然方法10.4(2013):315-323。PubMed.PMID:23435261

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