vwin德赢娱乐平台荧光蛋白101:荧光生物传感器

由杰西卡韦尔奇

AddGenie Mary Tearing促进了本文的内容。

生物传感器(“生物传感器”)是监测过程或检测特定分子的生物工具。的传感器组分通常是经历其检测到的分子的构象变化的蛋白质。然后生成此更改记者信号。记者信号可以是电化学或光线的发光荧光记者特别受欢迎。我们将为您提供荧光生物传感器的介绍,但请记住,生物传感器如何工作,您应该始终检查所选质粒细节的相关出版物。

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生物传感器的类型

在选择生物传感器时,你首先需要决定追踪或测量你感兴趣的过程的最佳方法。根据你想监控的过程,可能有多个步骤你可以检查,例如,对于酶反应,你可以测量底物的消耗或产品的生产或酶活性。

小分子生物传感器

向荧光生物传感器添加钙导致它发荧光addgene有许多测量浓度的传感器小分子比如阿拉伯糖,过氧化氢或者钙和锌离子。一些生物传感器包含一个单一的荧光蛋白,融合到一个区域来感知给定离子的浓度——我们将使用钙生物传感器作为例子。许多钙生物传感器包括GFP融合到钙调素(CaM)和鸡肌球蛋白激酶钙调素结合区域RS20。当钙缺失时,结构体不会发出荧光;当存在时,钙诱导CaM/RS20相互作用,从而改变FP的结构组织并激活荧光信号。蓝色的火焰Geco生物传感器罗伯特坎贝尔的实验室显示钙依赖性荧光增加高达11,000倍。

FRET Biosensors是另一种常见的生物传感器。蓝色的火焰“Cameleon”钙传感器由...制作Roger Tsien的实验室含有由凸轮和M13分离的vwin德赢娱乐平台两个荧光蛋白(荧光配对)。当钙结合时,它触发凸轮/ m13相互作用,从而增加荧光蛋白之间的褶皱转移。vwin德赢娱乐平台FRET对生物传感器的创建高度适用,可以使用定制FRET生物传感器使用CPFRET套件由...制作Olivier Pertz的实验室

其他生物传感器跟踪蜂窝特征,如pH,氧化还原状态和膜上的电压。这些传感器通常遵循上述相同的模式 - 感测结构域基于配体存在或改变细胞条件,引起荧光信号的变化。

其他类型的生物传感器

专注于特定的基因或蛋白质,查看我们的基因特异性生物传感器。这些构建体通常用于通过时间监测酶活性或磷酸化。您还可以使用生物传感器跟随蛋白质或DNA结合,酶或转录激活,构象变化等过程,翻译和蛋白质转位。

针对您的生物传感器

在真核细胞中表达生物传感器之前,考虑生物传感器表达的最佳位置。你看的是细胞内分子还是细胞外分子?通过将生物传感器融合到细胞器特异性的靶向信号或跨膜区域,生物传感器可以被定位到特定的胞室,如细胞核、线粒体、内质网(ER)、液泡或细胞膜。例如蓝色火焰线粒体靶向钙传感器CMV-MITO-GEM-GECO1和蓝色火焰细胞外谷氨酸传感器pCMV .iGluSnFR (MinDis)

选择你的记者

不要忘记生物传感器的另一端:哪种荧光蛋白最适合您的实验室和实验设置?考虑你有什么样的仪器,你的实验条件。例如,荧光标签是否需要pH稳定或耐受特定溶质浓度或温度?更多建议,请参阅我们的文章如何选择荧光蛋白单身和多色成像实验。

最后,您将使用什么样的系统来检测您的荧光蛋白?检测方法的类型取决于您要查找的信息类型。下面我们总结了一些常见的荧光检测方法和它们通常用于的实验类型。

表1.表演生物传感器实验时要记住的要点

实验 检测方法 笔记
定量过程 基于板的测定(板读数器)

检测细胞群中的平均荧光量(即在板上井中)。用来随时间或在各种条件下跟踪过程(例如酶活性)

细胞内的本地化

荧光显微镜

可视化单个单元的组件
分离/鉴定荧光标记的组分 荧光激活的细胞分选(用于细胞);荧光HPLC(蛋白质或其他分子) 分离或量化细胞,蛋白质或其他标记荧光分子的分子


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