使用AAV技术进行精确神经元定位的三个关键考虑因素

由Susanna Bachle.

了解脑发展,学习和行为背后的生物学在许多大脑区域,神经元网络和特定的神经元群体中提出了许多挑战的神经科学。为了梳理不同的神经元如何影响某种输出,神经科学家已经开始使用更精确的遗传工具:活化剂,抑制剂,传感器,重组酶等。在...的帮助下adeno相关的病毒载体vwin668(AAV),神经科学家可以将经典的遗传工具与特定神经元亚型的操纵结合,并确定这些变化如何影响表型。vwin668病毒载体和遗传方法是不断精制和开发的,所以可以选择许多组合来为您的实验选择!

去年年底,我们举办了我们的第一个AAV教育和开发研讨会,旨在激发激发策略的使用组合基于AAV的分子工具对于有针对性的神经元操纵。研讨会的目标是将这些讨论的结果作为一个公开可访问的实用指南分享最近发表于神经肿瘤的前沿

以下是本文的三个主要的外卖器,用于使用AAV设计实验:

1.将您的病毒载体纳入您的兴趣细胞:AAV的热衷和行政途径

AAV的Tropism由测定AAV血清型的病毒衣壳蛋白定义。在转导期间,病毒衣壳蛋白与靶细胞表面蛋白结合,并且该相互作用决定了用于特定细胞类型的AAV血清型的特异性和效率。找到Select Aav Serotypes的一些转换特性表2.从纸上。

通常可以通过定向的脑注射来实现AAV进入大脑,但有些血清型可以在静脉注射后穿过血脑屏障。即使在大脑中注射到同一个位置时,某些血清型也从注射部位进一步扩散。有关AAV管理路线的神经科学的概述表格1从纸上。

2.操纵您的兴趣细胞:分子工具和传感器的细胞类型特异性表达

例如,古典遗传工具的组合CRE / LOXP或FLP / FLT,AAV载体是通过限制对遗传定义的细胞类型的表达来控制转基因表达的常见方法。通过使用促进剂和增强剂如启动子和增强剂,多调整器和翻译后调节元件,还可以在非转基因表达中实现特异性转基因表达。这些方法的实例在表3-7中给出。

3.利用AAV的神经元选择性:使用病毒策略靶向定义的神经元群体

结合不同的方法可以进一步增加细胞靶向的特异性。例如,在一个位置注入AAV可能导致在突出大脑的不同区域的神经元中表达过致盲有效载荷。然后可以针对更局部定义的一组神经元光学刺激。限制光线暴露于特定区域与注射部位处的AAV的递送导致靶细胞群的特异性增加。

组合策略也可用于逆行跟踪:可视化接收来自区域信息的神经元。在图1所示的示例中,在一个位置注入逆行AAV导致其细胞体中的OPSIN表达。然后,不同脑区域中的光学刺激可以揭示感兴趣的细胞体。

逆行逆行跟踪的比较

神经科学的工具箱是变得越来越多才多艺。为了补充可用的遗传编码工具的财富,研究人员还通过增加转基因货物能力,增强靶向大脑中特异性细胞类型的前进的运输效率和工程病毒衣壳来制定改善交付的方法。

无论您选择哪种实验方法,都必须考虑每种方法的技术限制,并遵循最佳实践和指导方针。很高兴看到研讨会参与者的这种实用指南的发展 - 理论在科学中开放和分享。

我们很高兴通过共享试剂来支持神经科学区,也很兴奋地支持神经科学社区,也是方法信息。要补充这些努力,我们开始通过最近推出的数据分享数据AAV数据集线器是一个开放平台,研究人员使用来自我们的病毒服务的AAV可以共享实验设计和数据。随着这些不同的开放式科学方法,我们的目标是加快分享速度科学的速度。

查看此处的精确神经元瞄准指南!


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