Spyligase不可逆转地将肽锁在一起,以获得有效的细胞捕获

由肯德尔摩根

spyligase.Mark Howarth的实验室在牛津大学,致力于产生基于本质上发现的分子特征的新工具来操纵生物学,具有改善疾病诊断和癌症的最终目标。他们最近推出过spytag / spycatcher系统,基于孤立的蛋白质链球菌Pyogenes将自身锁在一起,产生不可逆的蛋白质肽相互作用。在发表的一项研究中国家科学院的诉讼程序今年3月,他和他的同事们通过对此进行剖析,又向前迈出了重要的一步链球菌蛋白质分为三个部分。他们的努力产生了一种蛋白质,他们称之为spyligase.(Spy来自链球菌中的“S”和化脓性细菌中的“py”),能够将两个肽标签锁在一起。

Spyligase克服了使用肽标签的限制,这通常仅形成弱和可逆键。Howarth的团队已经在他们的PNA纸上证明了Spyligase可用于将辅助或抗体与常见的肿瘤标志物联系起来,以随后捕获表达低水平的肿瘤抗原的癌细胞。我要求豪豪告诉我们更多关于Spyligase,其开发及其潜在用途的信息。

开发新工具

addgene:你在哪里得到了发展的想法spyligase.

罗马黎各:它来自我们在开发Spytag / Spycatcher系统方面的工作,以便能够以遗传编码的方式无法可逆地抓住蛋白质。spytag.很好,小,只有13个氨基酸,但是SpyCatcher是蛋白质。您可以将避免的避免熔断器融合在东西上,但如果可以将一个肽标记加入另一个肽标签,甚至更好。

addgene:肽标签用于建立较大的蛋白质组件的优点是什么?

罗马黎各:肽标签可以很普通;你应该能够在各种不同的蛋白质系统中使用相同的肽标签它们不应该太碍事。特别是,我们希望能够通过共价键来构建组件,这样组件就不会散架,即使在几天之后,或者在有力量作用于它们的情况下。对于我们正在研究的应用,循环肿瘤细胞的磁性分离,我们发现结合的稳定性对于有效捕获非常重要。我们希望能够建立一个由共价键连接的高度多价组装,这样链中就没有薄弱环节了。

addgene:是怎样的链球菌Pyogenes蛋白质领域为此目的是理想的吗?是什么导致你的呢?

罗马黎各:我们在圣安德鲁斯的合作者Uli Schwarz-Linek发现了该领域。它很小,高度稳定,并将这个惊人的化学锁定在一起 - 没有人知道什么。许多其他革兰氏阳性细菌在其表面蛋白质中具有这种化学。它最好地研究了他们用于锚定宿主细胞的Pili。

addgene:沿途有任何重大障碍吗?

罗马黎各:只是通常的血液,汗水和泪水。(感谢我们健康的血液捐赠者,在我们制定细胞捕获系统时保持继续。)

癌症和其他应用

addgene:这项技术在癌症方面意味着什么?

罗马黎各:捕获循环肿瘤细胞(CTC)对我们对癌症的理解和治疗产生了重大影响。很明显,人们需要捕获各种各样的CTC,以应对癌症的变异,而不仅仅是具有高标记表达水平的CTC。实验室一直在尝试不同的方法来改善CTC捕获,但我希望我们的抗体触手可能对磁捕获或使用微流体装置捕获的这种挑战产生影响。

addgene:你认为这个工具还有什么其他用途?

罗马黎各:多种蛋白可用于通过原子力显微镜(AFM)的蛋白质的机械研究。也许聚光剂可以帮助捕获其他稀有细胞类型,如干细胞或感染疟疾或其他寄生虫的细胞。

addgene:您是否为希望购买和使用Spyligase系统的人有任何特定的提示或技巧?

罗马黎各:国家科学院的诉讼程序论文[3月17日在线发布]应该涵盖它。

addgene:好的,谢谢你的时间,谢谢你用addgene沉积质粒。

罗马黎各:我们提交了我们所有的质粒,可能很有用的其他Addgene。我是你的超级粉丝;谢谢你的t恤!


引用:

Spyligase肽 - 肽连接聚合辅助以增强磁性癌细胞捕获。Fierer等人(2014年3月17日,美国国家科学学会期刊)。PubMed.

通过工程细菌粘合剂形成蛋白质快速共价键的肽标签。Zakeri等人(2012年3月20日美国自然科学学会期刊;109(12):E690-7。2012年2月24日。PubMed.


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