vwin668病毒载体101:伪分型

詹妮弗德赢在线曾

德赢在线

为了使用慢病毒载体递送基因,您需要在病毒表面上的包膜蛋白vwin668和宿主细胞中的相应受体。这些包膜受体配对中的一些是宽的,允许递送到许多细胞类型中,而另一些是特定的,允许递送到几种细胞类型。

如果你想在细胞类型中寻找更多的控制慢病毒载体将感染,伪类型可以帮助。在伪分型中,使用来自另一病毒的病毒包膜蛋白制造病毒载体,以vwin668限制或扩大宿主细胞的范围(向性)。伪分型只对包膜病毒进行,如慢病毒、逆转录病毒和狂犬病毒。

如何伪曲面

为了假定您的病毒载体,您使用相同的方法生成慢病毒的协议但是你用的是不同的包膜糖蛋白而不是野生型糖蛋白。拟型蛋白编码在包膜质粒上,该质粒包含一个启动子、包膜基因和一个多亚尾巴

三种慢病毒生产质粒图谱。转移质粒包含LTRs、启动子和cDNA或shRNA。包装质粒包含CMV、Gag、Pol和rev。包膜质粒对包膜进行编码。
图1:慢病毒生产使用三种质粒:(1)转移质粒,(2)包络质粒,和(3)包装质粒。将它们转染到产生慢病毒颗粒的靶细胞中。

为什么pseudotype?

慢病毒和逆转录病毒通常用野生型包络靶向免疫细胞。然而,假型型允许这些病毒感染神经元。除了改变病毒的宿主的热衷之外,您可能会对您的病毒拟定型有很多其他原因:

  • 降低细胞毒性。不同的包膜蛋白具有不同水平的细胞毒性,细胞毒性背后的机制也不同。例如,流行的VSV-G包膜蛋白使其感染的细胞融合在一起,形成合胞体,导致细胞死亡。细胞毒性也可能依赖于细胞类型:如果一个细胞对特定的包膜蛋白有很少的受体,它就会占用更少的病毒,受影响也更小。
  • 改变对血清的敏感性。不同的假型病毒通过血清中的非特异性补体机制差异差异。有时这是由于病毒载体的产生。例如,细胞系中的囊泡口炎病毒,HIV-2和人泡沫病毒的生产vwin668表达半乳糖基(alpha1-3)半乳糖基(alphagal)糖比在不表达这些糖的细胞系中产生的病毒稳定。(Takeuchi等,1997)。甲糖最终在封套中,是通过抗甲基抗体补充基础杀伤的靶标。无论生产者细胞类型如何,VSV-G包络蛋白因血清而灭活,但其他信封(例如其中)长臂猿白血病病毒更稳定(Sandrin等,2002)。
  • 更安全地研究病毒病原体。最近,许多SARS-CoV-2研究者开始研究伪批分SARS-COV-2穗蛋白进入Lentivirus等低级BSL病毒(Crawford等,2020)。这样,他们可以在不使用完整的SARS-COV-2病毒的情况下在感染细胞系中研究刺蛋白的作用。科学家们一直在使用类似的伪型方法,在BSL-2实验室中使用其他病毒而不是BSL-3或BSL-4实验室。有关更多详细信息,请查看此评论文章已发布《医学病毒学评论(李等。,2018)。

伪型SARS-COV-2穗蛋白在293T细胞中的示意图。
图2:与SARS-COV-2穗蛋白的假型,科学家编码在包膜质粒上的尖峰蛋白。图片来自Crawford等,2020年

广泛的热情:VSV-G伪型

常用的伪型蛋白蛋白质为VSV-G,或囊泡口炎病毒G蛋白。VSV-G是将磷脂酰碱和低密度脂蛋白受体(LDLRS)与细胞表面结合到细胞中的三聚体蛋白质。

常用VSV-G的原因是它擅长感染大多数细胞,但并非所有的。例如,造血干细胞,T细胞和B细胞中的LDLR表达低。用VSV-G假型病毒感染这些细胞需要使用其他方法对LDLR表达的上调。

在制备方面,VSV-G是稳定的,可以承受超速离心,帮助科学家达到高滴度(综述了Joglekar和Sandoval,2017)。该高滴度是VSV-G用于转诱导干细胞和神经元的原因之一。

然而,VSV-G的广泛的热衷可能是不希望的体内由于在到达靶细胞之前,研究是有可能脱靶感染性的潜力,因为它可以在达到靶细胞之前结合和转移许多细胞类型。VSV-G也在高浓度下毒性,如上所述,并且是由血清中补体系统灭活(DePolo等,2000)。

其他包络蛋白为伪型

虽然VSV-G是最常用的伪型包膜蛋白,但有更多的包络蛋白可以用于特定目的以前描述过(表1,Gutierrez-Guerrero,等,2020)。由于逆转录病毒与慢病毒密切相关,因此许多逆转录病毒封套蛋白在慢病毒颗粒上已经叠布了。

狂犬病糖蛋白

狂犬病糖蛋白靶向神经元细胞,可以在a中行驶逆行方向从突触到细胞体,使其成为研究神经元连接的绝佳工具。然而,由于狂犬病毒的毒性,将另一种带有狂犬糖蛋白的病毒假型更有意义。慢病毒载体vwin668也很擅长感染神经元,引起最小的炎症反应,但不被轴突终末吸收,不能用于神经元追踪或外周基因传递。将狂犬糖蛋白结合到慢病毒包膜中,可以使慢病毒载体逆行运输,而且比单独使用任何一种病毒具有更高的神经元转导效率和更好的安全性。

这是带有狂犬病糖蛋白的拟型慢病毒现在用作逆行追踪器这样科学家就可以识别投射到大脑特定区域的神经元(Mazarakis et al., 2001)。这种方法也可以让科学家追踪到神经元的投射到细胞体。

狂犬病毒和EnvA-TVA系统

使用狂犬病病毒的另一种方法是删除进入细胞(Rabies DG)所需的糖蛋白。因为狂犬病DG无法自己感染神经元,所以需要伪拟合。这利用了EnvA-TVA receptor-envelope系统(Wickersham等,2007)。该系统需要首先使用AAV将狂犬病糖蛋白与神经元的TVA受体一起提供,然后用enva递送狂犬病DG假型。这使得狂犬病DG仅感染表达TVA和狂犬病糖蛋白的神经元。糖蛋白将掺入复制的狂犬病病毒包膜中,逆行地旅行,并将Synapse跳转到先前的神经元(Wichersham等,2007)。然而,一旦狂犬病DG进入这种神经元,它就不能感染任何后续神经元,因为它不表达狂犬病糖蛋白。

其他伪型选项

有很多很多其他的用于假分型的包膜蛋白的选择,可以是广泛的或特定的,以满足您的需要。查阅这些综述文章,可以找到关于不同病毒膜、向性和优缺点的表格和信息:

  • 表1(Joglekar等人,2017)
  • 表1(Gutierrez-Guerrero等,2020)
  • 表1(克罗宁等,2005)

下载病毒vectors 1vwin66801电子书


引用和资源

参考:

Crawford KHD, Eguia R, Dingens AS, Loes AN, Malone KD, Wolf CR, Chu HY, Tortorici MA, Veesler D, Murphy M, Pettie D, King NP, Balazs AB, Bloom JD(2020)用于SARS-CoV-2 Spike蛋白的慢病毒粒子假分型方案和试剂。病毒12:513。https://doi.org/10.3390/v12051313

Cronin J,Zhang X-Y,Reiser J(2005)通过伪型改变慢病毒载体的热衷。vwin668CGT 5:387-398。https://doi.org/10.2174/1566523054546224.

DePolo NJ, Reed JD, Sheridan PL, Townsend K, Sauter SL, Jolly DJ, Dubensky TW Jr(2000)人细胞产生的VSV-G伪慢病毒载体颗粒被人血清灭活。分子治疗2:218-222。https://doi.org/10.1006/mthe.2000.0116

Gutierrez-Guerrero A,Cosset F-L,Verhoeyen E(2020)Lentiviral vector pseudotypes:珍贵的工具,提高造血细胞基因改性研究和基因治疗。病毒12:1016。https://doi.org/10.3390/v12091016

Joglekar, Sandoval S(2017)拟型慢病毒载体:一个载体,许多伪装。vwin668人类基因治疗方法28:291-301。https://doi.org/10.1089/hgtb.2017.084

李琦,刘Q,黄W,李X,王Y(2017)封闭病毒开发的现状。Rev Med Virol 28:E1963。https://doi.org/10.1002/rmv.1963

Mazarakis ND(2001)狂犬病毒糖蛋白假分型慢病毒载体能够逆行轴突运输,并在外周传递后进入神经系统。vwin668人类分子遗传学10:2109-2121。https://doi.org/10.1093/hmg/10.19.2109

Sandrin V, Boson B, Salmon P, Gay W, Nègre D, Le Grand R, Trono D, Cosset F-L (2002) Lentiviral vectors pseudotyped with a modified RD114 envelope glycoprotein show increased stability in sera and augmented transduction of primary lymphocytes and CD34+ cells derived from human and nonhuman primates. Blood 100:823–832 .https://doi.org/10.1182/blood-2001-11-0042

Takeuchi Y,Liong Sh,Bieniasz PD,Jägeru,搬运工镭射唱片,弗里德曼T,McClure Mo,Weiss Ra(1997)通过半乳糖基(α1-3)半乳糖基化对人血清的rhabdo-,lenti和乳粉的敏化。病毒学杂志71:6174-6178。https://doi.org/10.1128/jvi.71.8.6174-6178.1997

Wickersham, Finke S, Conzelmann K-K, Callaway EM(2006)逆行神经元追踪一个缺失突变的狂犬病毒。Nat Methods 4:47-49。https://doi.org/10.1038/nmeth999.

Wickersham, Lyon DC, Barnard RJO, Mori T, Finke S, Conzelmann K-K, Young JAT, Callaway EM (2007) Single - synaptic Restriction of Transsynaptic Tracing from Single, genetic Targeted Neurons of Single - synaptic Tracing .(生物谷bioon.com)神经元53:639 - 647。https://doi.org/10.1016/j.neuron.2007.01.033

addgene博客上的其他资源:vwin.com mobile

资源在Addgene.org上:

主题:vwin668,vwin668病毒载体101.,逆转录病毒和慢病毒载体vwin668

发表评论

分享科学刚刚变得更容易...订阅我们的博客

订阅